Uma vez que o ftalato mais tóxico a nível do sistema reprodutor é o DEHP, é nele que nos vamos focar explicando o seu mecanismo subjacente.

 

Um dos órgãos-alvo do DEHP é o ovário. Aqui, é responsável pela diminuição dos níveis de produção de estradiol. De facto, em ratos, a presença de DEHP, prolonga o cio a anovulação. Como consequência deste último ponto, verifica-se uma ausência de corpo luteo e os folículos tornam-se císticos. Por este motivo, o local de produção de estradiol- folículo pré-ovulatório – deixa de existir havendo uma quebra na sua concentração e diminuição nas células da granulosa, sendo estas o alvo citológico do DEHP.

 

A patogénese da lesão pode ser explicada pelo facto do DEHP suprimir a produção de estradiol nas células da granulosa, fazendo com essas concentrações sejam tao baixas que se tornem incapazes de estimular o aparecimento do pico de LH.

O MEHP, o metabolito ativo do DEHP, é o único ftalato capaz de diminuir, significativamente e in vitro, a produção de estradiol nas células da granulosa de ratos.

MEHP diminui o estradiol e a aromatase nas células da granulosa

 

As células da granulosa são capazes de responder à hormona estimuladora dos folículos (FSH) por um mecanismo de estimulação de enzimas estrogénicas e por diferenciação. In vivo, a produção de hormonas pelos ovários é controlada pela FSH e pela LH responsáveis por estimular, respetivamente, as células da granulosa e a teca. As gonadotrofinas FSH e LH ligam-se a recetores específicos de proteína G, estimulando a adenilciclase a trabalhar, o que culmina num acumular de cAMP. Este, por sua vez, ainda vai ativar um outro conjunto de enzimas envolvidas na síntese de esteroides.

 

O colesterol, pela enzima P450scc, vai ser convertido a pregnenolona – enzima central no processo da síntese de todas as classes de esteroides. Esta, de seguida, vai ser transformada em androstenediona, por um conjunto de enzimas (17α-OHase 17,20-Lyase) que está presente unicamente na teca e não nas células da granulosa. Por fim, esta hormona é convertida em testosterona, por ação da 17β-HSD III, e vai-se difundir para as células da granulosa. Aí, passará a estradiol pela enzima aromatase. Esta é estimulada quer pela ação direta da FSH na granulosa, que pelos substratos da aromatase, ou seja, os androgénios produzidos na teca.

 

Nas culturas celulares da granulosa do rato, o MEHP vai inibir a FSH e, por sua vez, também o vai fazer relativamente à produção da progesterona.  É de ressalvar que, in vitro, mesmo quando as células estão estimuladas pela FSH ou por outro análogo não degradável do cAMP, se o MEHP estiver presente, vai haver sempre diminuição do estradiol. Para além disto, o resultado do estradiol é independente do efeito da produção de progesterona nas células da granulosa.

O MEHP consegue fazer com o máximo da atividade da aromatase decaia sem atuar como um inibidor enzimático. Estudos recentes demonstram que o MEHP diminui o RNAm que codifica a aromatase de forma proporcional à quantidade de composto existente no organismo. Assim, o  MEHP é específico para a aromatase, não sendo responsável por diminuir os níveis de transcrição de uma enzima associada ao colesterol – P45scc – nas células da granulosa.

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Ativação dos PPAR nas células da granulosa

 

Estudos recentes sugerem que o MEHP se pode comportar como um peroxissoma proliferador que possui efeito tóxico nas células da granulosa. Estes exercem o seu efeito através da ativação de recetores específicos denominados de PPARs, presentes no ovário. A isoforma mais frequente na granulosa é a PPARγ. Aquando a ligação de um substrato a estes recetores verifica-se uma inibição quer da expressão (mRNA diminui), quer da atividade da aromatase e, consequentemente, um decréscimo na quantidade de estradiol existente.

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Proposta de mecanismo para as células da granulosa

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Variados autores propõem que o DEHP/MEHP mimetiza os efeitos dos ácidos gordos nas células da granulosa, já que é evidente são capazes de se associar à da FABP (proteína de ligação dos ácidos gordos). O MEHP inicialmente inibe a produção de cAMP, estimulada pela FSH, possivelmente através da ativação de uma proteína G inibitória (Gi). Enquanto o MEHP se difunde na célula, ele vai ativar os PPARs. Note-se que apesar de eles serem ativados não há, pelo menos para já, evidencias de que o MEHP se liga aos PPARs. Após a então ativação dos PPARs verifica-se a libertação de ácidos gordos endógenos que outrora se encontravam ligados às FABPs e a diminuição da transcrição da aromatase, sem haver alteração dos níveis de P450scc, que representa o primeiro mecanismo de toxicidade associada ao sistema reprodutor feminino. Associado a isto, há um aumento da transcrição de FABP nas células da granulosa, criando assim mais proteínas de ligação para os PPAR ativadores.

 

De uma forma geral, um folículo pré-ovulatório presente na granulosa responde a níveis basais de FSH, tendo como resposta um aumento do cAMP e da proteína cinase A, o que estimula um aumento da expressão da aromatase. Durante o período pré-ovulatório é produzido estradiol em quantidade suficiente de modo a estimular o aparecimento de LH. A acompanhar este aumento, verifica-se o silenciamento rápido da aromatase através da inibição da transcrição do mRNA associado a esta enzima.[11]